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雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的检测 UPLC-MS/MS法

2019-11-08

        2019年9月13日,美国FDA发布公告称,多个品牌生产的雷尼替丁中含有低浓度的可能致癌物 N-亚硝基二甲胺(NDMA),该物质一般存在于水和食物中,在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤,具有致癌、致突变的特点。NDMA分子量小,亲水性强,对检测方法要求更加严格。


        雷尼替丁,强效组胺H2受体拮抗剂,主要用于胃酸过多、烧心等的治疗,也是目前比较主流的治疗溃疡病的药品。在雷尼替丁中检测出NDMA可能会对用药安全性产生较大威胁,因此在药物中准确监测NDMA非常重要。


        针对此次“雷尼替丁”事件,88必发官网_88必发娱乐城_88必发官网手机版结合中国食品药品检定研究院发布的《关于开展雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺检验工作的通知》及FDA 10/17/2019公布最新检测方案,建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱—盐酸雷尼替丁中NDMA的检测方法,本方法用于测定雷尼替丁药物产品和原料药中NDMA的含量,可供广大分析工作者参考。

 

        以下为详细解决方案,敬请参考!

 

1、适用范围
        本方案适用于盐酸雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的检测。


2、标准品配制
(1) N-亚硝基二甲胺(NDMA)储备液1.0 μg/mL:准确称取适量标准品,用甲醇配制成1.0 μg/mL的储备液;
(2) 对照品溶液2.0 ng/mL:吸取适量储备液,用水配制成2.0 ng/mL对照品溶液;
(3) 灵敏度溶液1.0 ng/mL:吸取适量储备液,用水配制成1.0 ng/mL灵敏度溶液。

 

3、样品制备
(1) 盐酸雷尼替丁供试品溶液制备
    取供试品约300 mg,精密称量于10 mL容量瓶中,用水定容至10 mL。

(2) 盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备
取本品内容物适量(约相当于雷尼替丁300 mg)于15 mL离心管中,准确加入10 mL水,振荡40 min,6000 rpm离心2 min,取上清液过微孔滤后上机分析。
(3) 盐酸雷尼替丁片供试品溶液制备
取本品5片,精密称量,研细,准确称取细粉适量(约相当于雷尼替丁300 mg)于15 mL离心管中,加入10 mL水,振荡40 min,6000 rpm离心2 min,取上清液过微孔滤膜后上机分析。


4、分析条件
UPLC 条件
色谱柱:Spursil C18, 100 x 3.0 mm, 3.0 μm (Cat#:82022)
流  速:0.7 mL/min   
进样量:10 μL  
柱  温:30 ℃
流动相:A: 0.1%甲酸水    B: 0.1%甲酸甲醇
梯度设置

时间/Min.

0

1

3

3.5

7.5

A (%)

95

95

43

95

95

B (%)

5

5

57

5

5

 

质谱条件

离子源:APCI源,正离子模式

检测方式:多反应监测

NC电流:3 μA

雾化气压力:50 psi

离子源温度:500 ℃

气帘气压力:20 psi

碰撞气CAD:8

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

药物名称

定性离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

定量离子对

(m/z)

(母离子/子离子)

碰撞气能量/eV

去簇电压/V

N-亚硝基二甲胺

75.0/43.0

75.0/58.0

22

50

75.0/58.0

18

 

5、实验结果

(1) 重复性实验结果
对照品溶液2.0 ng/mL重复进样6次结果如下

对照品溶液重现性数据总结

数据名称

峰面积

average

stdev

RSD

2.0 ng/mL-1

6590

6388.3

309.6

4.8%

2.0 ng/mL-2

6860

2.0 ng/mL-3

6330

2.0 ng/mL-4

6250

2.0 ng/mL-5

6350

2.0 ng/mL-6

5950

 

6针NDMA 2.0 ng/mL的XIC对比图

 

(2) 灵敏度实验
系统适用性灵敏度溶液1.0 ng/mL NDMA主峰信噪比>3。

 

NDMA 1.0 ng/mL XIC图
 

(3) 标准曲线
    用纯水逐级稀释NDMA储备液,配制成1.0 ng/mL,2.0 ng/mL,5.0 ng/mL,10.0 ng/mL,50.0 ng/mL,100.0 ng/mL,500.0 ng/mL标准溶液。将标准溶液分别进样,以峰面积对浓度做标准曲线,在线性范围内线性良好,相关系数0.9998。

 

NDMA标准曲线图

 

(4) 加标回收实验
    取适量胶囊样品(约相当于雷尼替丁300 mg),加入适量NDMA标准溶液,按照盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备方法进行实验。

盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA检测的添加回收结果(%)

 

(5) 阳性样品实验
    取适量样品(约相当于雷尼替丁300 mg),按照盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备方法进行实验。空白实验是样品不取,直接加入水振荡提取,然后上机。

盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA检测结果

样品名称

批号

检出浓度(ng/mL)

含量(ppm)

盐酸雷尼替丁胶囊

6417013

10.1

0.34

盐酸雷尼替丁胶囊

6419003

64.5

2.15


           
盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA检测XIC图

 

(6) NDMA和雷尼替丁分离度验证实验
    由于雷尼替丁保留较差,普通色谱柱上容易和NDMA共洗脱,把含有NDMA和雷尼替丁的混合标准溶液直接上机,本方法可将两个化合物完全分离。


NDMA和雷尼替丁混标TIC图(RT1.51  NDMA ,RT2.86  雷尼替丁)

 


NDMA XIC图

 


雷尼替丁 XIC图

 

雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的检测 相关产品信息:

货号

名称

规格

标准品

47747

N-亚硝基二甲胺(NDMA) [62-75-9]

1000 μg/mL 溶于甲醇 1 mL

色谱柱及保护柱

82022

Spursil C18 极性改性反相色谱柱

100 x 3.0 mm, 3.0 μm

HPLC溶剂·缓冲盐

50102

甲醇 HPLC级

4 L

50144

甲酸 HPLC级

50 mL

通用色谱产品

52401B

瓶架/蓝色

50孔

52401A

瓶架/白色

50孔

30039

FitMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.22 μm 100/pk

30040

FitMax针头式过滤器 Nylon

13 mm, 0.45 μm 100/pk

1034

样品瓶(棕色/螺纹)

2 mL, 100/pk

1035

样品瓶盖/含垫(已经组装)

100/pk

H80465

HPLC 进样针

25 μL

红色货号产品火热促销中

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